一、无菌室的灭菌
1. 定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。超净台上滤网需每月清洗1次。
2. CO2孵箱（培养箱）灭菌：用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射。
3. 实验前灭菌：打开紫外灯、超净台各20-30分钟。在开紫外灯杀菌前，应确认无菌室无人后方可开紫外灯杀菌。
4. 实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
５．定期检测下列项目：钢瓶之CO2压力；CO2培养箱之CO2浓度、温度、及水盘是否有污染（水盘的水用无菌水，每周更换）；无菌操作台内之气流压力，定期更换紫外线灯管及HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。
6. 水槽可添加消毒剂（Zephrin 1:750），定期更换水槽的水。
二、实验人员的无菌准备
1. 肥皂洗手；
2. 穿好隔离衣，放好拖鞋；
3. 用75％酒精棉球擦净双手；
三、无菌操作的要点
1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面；
2.靠近酒精灯火焰操作；
3.器皿使用前必须过火灭菌；
4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火；
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰，如吸管不能碰到废液；
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
